??????? 雖然質譜聯(lián)用液相色譜已被證明是發(fā)現(xiàn)組學（蛋白質組學、脂質組學、代謝組學、食物組學和糖組學）領域的強大工具。組學研究經常受到樣本復雜性的挑戰(zhàn)。在處理少量樣品、小體積和復雜的樣品基質（生物流體和單細胞分析）時，對感興趣的分子進行識別和量化可能特別困難。液相色譜柱小型化可以克服這些挑戰(zhàn)。減小色譜柱內徑 (ID) 會降低色譜稀釋度并提高靈敏度，從而實現(xiàn)更高效的 MS/MS 采樣，從而實現(xiàn)更多的分子鑒定。
??????? 當樣品量被注入色譜柱并被周圍的溶劑稀釋時，就會發(fā)生這種稀釋。在這種情況下，更少的溶劑意味著更少的色譜稀釋，這是使用更小的內柱直徑的結果。色譜稀釋度的降低會導致離子靈敏度的提高，從而實現(xiàn)更有效的 MS/MS 采樣，從而實現(xiàn)更多的分子鑒定。恒譜生新推出10#x20空柱管總成，具有較小內徑的小型化液相色譜柱可提高靈敏度。
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??????? 從理論上講，將色譜柱內徑從 2.1 mm 縮小到 0.300 mm 會導致樣品濃度增加 49 倍，這將轉化為靈敏度提高 49 倍。實際上，情況并非總是如此，靈敏度是通過離子強度測量的，離子強度取決于樣品濃度以外的其他因素，例如分析物的電離性質，以及 LC-MS 設備（發(fā)射器類型）和源參數。
?????? 一、 根據色譜柱類型 (ID)，液相色譜中使用的典型流速和樣品裝載量。
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??????? 二、小型化優(yōu)勢
???????? 色譜柱小型化減少了色譜稀釋并大大提高了電離效率，這種組合使納流成為 Omics 領域非常理想的技術，當只有少量樣品可用和/或由于添加非揮發(fā)性溶劑或需要更好的電離時鹽。除了提高靈敏度、更高的 S/N（信噪比）和更低的 LLOQ（定量下限）之外，它還減少了溶劑消耗，從而降低了成本并有益于環(huán)境。同時，隨著流速的降低，有時需要增加梯度長度。梯度長度的增加會降低樣品通量。盡管如此，當需要樣品通量、靈敏度和穩(wěn)定性時，微流是一個很好的中間選擇。
??????? 此外，色譜柱堵塞和過載也需要被視為微觀固體，在蛋白質組學的情況下，未消化的蛋白質會堵塞小 ID 色譜柱，使其無法使用。因此，用戶必須小心在進樣前正確清潔樣品和/或使用捕集（柱前）柱以消除不希望的污染物到達小型柱。當使用捕集柱時，捕集器與柱對齊，樣品被裝入其中，而不需要的顆粒被浪費。一旦樣品被濃縮到捕集阱中并且沒有污染物，它就會被導向色譜柱進行分析。使用恒譜生鬼峰捕集柱有助于避免納米/微米級色譜柱污染并延長色譜柱的使用壽命。鬼峰小柱能夠將有機相中污染物，水相中污染物，緩沖鹽，流動相瓶和混合過程產生的污染物過濾。
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??????? 色譜分析柱小型化會帶來許多挑戰(zhàn)，但不可否認的是，好處大于這些挑戰(zhàn)。5微流和納流分離帶來全新的生物醫(yī)學進步和基礎科學知識的收獲使其成為一種強大的分析技術。
發(fā)布于: 2022-05-20